开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
背景：
Rab蛋白是一类小分子GTP蛋白。在鸟苷酸交换因子(GDP/GTP exchange factor, GEF)的作用下，GTP替代Rab蛋白结构域上的GDP，使得Rab蛋白被激活。激活的Rab蛋白可以插入到待转运的细胞器的膜上，进一步募集下游的相互作用蛋白，开始发挥其调节囊泡运输的作用。Rab蛋白也被证明参与了多种肿瘤细胞的迁移、入侵、增殖、信号转导以及药物耐受。姜黄素(curcumin)是从姜黄根茎中提取的一种植物多酚，药理作用广泛，主要有抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、抗突变等。研究表明，姜黄素的抗肿瘤作用机制主要与诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤侵袭转移、增强肿瘤细胞化疗敏感性等方面相关。本课题基于Rab27在肿瘤细胞的侵袭转移、凋亡过程中的关键作用，探讨Rab27姜黄素是否可以通过调控Rab27而发挥其抗人肝癌SMMC-7721细胞生长的作用，为姜黄素的抗肿瘤作用提供新的作用机制。
研究方法：
- 细胞系和培养条件
人肝癌细胞SMMC-7721以适量密度接种于培养瓶中，用含10%胎牛血清、100 U/ml的青霉素、100 U/ml的链霉素的RPMI-1640培养液培养，置于37 C恒温、5%CO2及饱和湿度的培养箱中培养，细胞贴壁生长。每隔1天传代一次，传代时用EDTA-胰酶混合液消化，以完全培养基终止消化，终止消化后按所需细胞量移入新培养瓶中，添加完全培养液至适量。
- MTT比色实验
MTT可被活细胞内的线粒体脱氢酶还原为蓝紫色的结晶甲臜，其溶解液颜色的深浅与细胞活力大小呈正比例。
将处于对数生长期的细胞制成细胞悬液，按一定密度接种于96孔酶标板内，每孔100 micro;l，设三个复孔，每孔再分别加入10micro;M、20micro;M、40micro;M的姜黄素溶液100 micro;l，并设置空白对照组。孵育24、48 h后，每孔加入20 micro;l MTT溶液，继续于孵箱中培养4 h。检测前取出，4000 rpm离心5 min，弃去全部上清，每孔加入100 micro;l DMSO，微型振荡器上振动5 min，使结晶完全溶解，用酶联仪测定570 nm波长处吸光值，计算姜黄素对细胞的生长抑制率：抑制率（%）=（1-加药组细胞平均吸光度/对照组细胞平均吸光度）times;100%
- Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测
将处于对数生长期人肝癌细胞SMMC-7721制成细胞悬液，按一定密度接种在6孔细胞培养板上，培养12h后，弃去培养基，每孔再分别加入10micro;M、20micro;M、40micro;M的姜黄素溶液2ml。培养24h后，将细胞收集并重悬于PBS中。用重组FITC标记的膜联蛋白和碘化丙啶（PI）双染色法来检测细胞凋亡引起的肿瘤细胞死亡，按照细胞凋亡检测试剂盒来操作。
4、蛋白质印迹分析法（Western Blot）
细胞给予10、20、40micro;M的姜黄素处理24 h后，1000 rpm离心收集细胞。将收集的各组细胞用冷PBS洗，转移至1.5 ml离心管中，2500 rpm，4°C离心，弃上清，重复一次。加入适量蛋白裂解液，吹打均匀，4°C放置1 h。12000 rpm离心20 min，上清为抽取的总蛋白，将其转移至另一1.5 ml离心管中。用BCA法测定蛋白含量，定量后样品1:3与4times;loading buffer混匀，沸水浴变性8 min，-20 °C冻存备用。配制12% SDS-PAGE胶，上样。80 V浓缩胶，120 V分离胶，2.5-3 h。电泳后，小心将丙烯酰胺凝胶从玻璃板上剥离，按尺寸剪取合适大小的Whatman滤纸及硝酸纤维素膜，上下各一层滤纸，中间为胶和膜，胶在负极，膜在正极，用玻棒仔细赶除气泡，采用半干式转膜法，恒压20 V。转膜后，将转入蛋白的硝酸纤维素膜浸入丽春红工作液中，染色2-5 min后，蒸馏水冲洗，观察转膜效率，用PBS洗去丽春红条带。将硝酸纤维素膜浸入10% BSA中，平放于摇床上，37°C温育1 h。封闭结束后，弃封闭液，用少量PBST洗干净。
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