开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题背景
T细胞（T cell、T淋巴细胞/T lymphocyte）是淋巴细胞的一种，在免疫反应中扮演着重要的角色，T细胞在胸腺內分化成熟，成熟后移居于周围淋巴组织中。随着细胞免疫治疗的日益深入，T细胞免疫疗法在临床肿瘤治疗中取得极大进展，已成为癌症综合治疗中最前沿的疗法之一。目前越来越多的研究表明，T淋巴细胞亚群在各种临床疾病如自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、变态反应性疾病、再生障碍性贫血、病毒感染、恶性肿瘤等都有异常改变，在各种疾病的发生、发展过程中不同的T淋巴细胞又产生着及其重要的影响。在肿瘤病人外周血中T淋巴细胞亚群数值都有异常，其特征是患者体内CD3 细胞、CD4 细胞明显减少，而CD8 细胞明显增加，CD4 /CD8 比值显著降低，说明肿瘤病人的细胞免疫功能处于免疫抑制状态，患者对识别和杀伤突变细胞的能力下降，形成了肿瘤的生长转移。
目前由于体外培养T细胞的活性较差，因而极大限制T细胞的临床应用。本课题打算探索原代T细胞提取分离及培养方法。从人外周血分离单个核细胞纯化培养T淋巴细胞, 常用的方法有尼龙毛吸附法、花环形成分离法、磁珠分选法。在这 3种方法中，前 2者所得到的 T淋巴细胞纯度低且含有 NK细胞 ,而磁珠分选法分离细胞的纯度可达95%-99.9%，回收率＞90%，所以在本课题中我们利用磁珠分选法分离得到高纯度的T细胞，再用不同生长因子刺激其以探索各因子对T细胞的增殖刺激作用。
要解决的问题
- T淋巴细胞来源问题（何种生物的何种组织）
- 采用什么方法进行细胞的分离及纯化培养（磁珠分选法的具体步骤）
- 如何检测纯化后的T淋巴细胞活性及纯度（T细胞表面标志物的检测）
- 采用什么培养模式进行培养才能达到预期的培养效果（培养基种类，培养方式）
- 探索磁珠分选后的T淋巴细胞在不同生长刺激因子培养下的扩增速率。
可行性分析
1.T淋巴细胞分布在人体中绝大多数组织中，其中外周血单个核细胞PBMC（peripheral blood mononuclear cell）中淋巴细胞（T/B）占很大一部分，因而采用外周血有来源易得简便，可行性大的优点；
2.课题背景中介绍到的磁珠分选法能高活性高纯度的分离纯化T细胞，并不损伤或影响后续细胞实验，为纯化培养提供了可行性；
3.T细胞表面标志物主要有①T细胞表面受体TCR②簇分化抗原CD2,CD3,CD4/CD8③MHC I类抗原④有丝分裂原受体PHA/ConA等，表面标志物的检测为纯度的检测提供可行性；
4.市面上多种类型的培养基为T细胞的培养提供条件。我们将探索何种培养基更有利于外周血提取的T淋巴细胞的培养。
- 研究方法和内容
本课题主要研究方法和内容有：
1.人外周血单核细胞的获取
2.免疫磁珠法进行T细胞的提取和纯化培养
3.利用流式细胞仪分析T细胞纯度及活力
4.用MTT法等探索淋巴细胞在不同生长刺激因子培养下的生长抑制率
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