开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 实验背景
丙二醛（MDA）是脂质过氧化的主要代谢产物。体内某些物质代谢过程及某些外源性药物或毒物在体内代谢变化过程中产生的自由基，可引起脂质发生过氧化作用代谢产生MDA等醛类物质，进而作用于脱氧核糖核酸、膜蛋白和酶等发生交联反应，使膜通透性增加，导致细胞膜结构、功能和代谢发生改变，这对细胞具有严重的损害作用。近年在许多疾病的发病机理研究中发现，脂质过氧化作用对某些疾病的发生发展起到一定作用。因此对体内MDA含量的准确测定在一定程度上可以反映脂质过氧化程度，体现细胞或机体受损伤的程度，对监控身体状况或疲劳程度，研究某些疾病或药物的作用，具有一定的意义。然而，MDA本身稳定性较差，加之生物样本基质中干扰成分多，因此直接测定通常会产生较大的偏差。采用衍生化反应生成稳定的MDA复合物，则可以大大提高检测的特异性、灵敏度和重复性，因此衍生化反应被广泛用于MDA的含量测定。衍生化技术就是通过化学反应将样品中难于分析检测的目标化合物定量的转化成另一易于分析检测的化合物，通过后者的分析检测可以对目标化合物进行定性和（或）定量分析。
①将一些不适合某种色谱技术分析的化合物转化成可以用该种色谱技术分析的衍生物。如某些高沸点、不汽化或热不稳定的化合物不能用气相色谱分析，通过衍生化转化成可以汽化的或热稳定的衍生物，然后再用气相色谱分析。
②提高检测的灵敏度（降低检测限），如液相色谱的紫外检测器灵敏度很高，但很多化合物没有紫外吸收或紫外吸收很弱，可以通过衍生化反应给这些化合物接上一个有强紫外吸收的基团，提高了这些化合物的检测灵敏度。又如气相色谱的电子捕获检测器（ECD）对含卤素的化合物有很高的灵敏度，可以通过衍生化反应将一些化合物接上卤素基团，提高这些化合物的检出灵敏度。
③改变化合物的色谱性能，改善分离度。如一些异构体在色谱上很难分离，通过衍生化反应，使两个异构体生成的衍生物色谱性能产生较大差异而得到分离。对一些难分离的物质对也可以选用某些衍生化试剂，只使其中一个发生衍生化反应转化成衍生物，两者可得到分离。
④利用衍生化反应可以帮助化合物结构的鉴定，这点在使用色谱amp; 质谱，色谱amp; 红外光谱和色谱以及核磁共振波谱联用方法确定化合物结构时作用更加明显。
目前，国内外对生物样本（如生物体液、尿液和动物组织等）中MDA含量的测定方法主要有紫外－可见分光光度法、荧光光谱法、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱－质谱法（GC-MS）、酶联免疫吸附法（ELISA）及新型光谱检测法等。
高效液相色谱法于２０世纪６０年代后期得到快速发展，其采用颗粒十分细的柱填料为固定相，并采用高压输液泵输送流动相，分离效果较好。高灵敏度检测器的发展使得检测方法的准确度、灵敏性和专属性得以保障。在脂质过氧化指标的测定中，利用ＨＰＬＣ对测定样本中的干扰成分进行分离，能够实现对样本中ＭＤＡ含量的准确测定。因此HPLC是目前准确测定MDA含量的黄金法则。
对于初步检测生物样本MDA的含量，可以使用MDA试剂盒。丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA微板法，MDAensp;Assayensp;Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituricensp;acid,ensp;TBA)反应产生红色产物的显色反应，特别适用于微量样本的检测。丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应，形成红色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在535nm处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。
- 实验目的及意义
通过构建大鼠的炎症模型，取相关样本对MDA进行分离和检测，观察相关药理性实验变化并通过方法学验证相关检测方法的准确性。
- 实验内容
- 取成熟期的大鼠，用脂多糖（LPS）进行造模，用量为200ug/kg每两天注射一次，共注射三次。期间观察大鼠的生理状态，如果大鼠出现异常状况，应减少或停止用药量，防止大鼠死亡。
- 大鼠炎症模型制备后，可先用MDA试剂盒进行初步测定，在确定造模成功后，可以取大鼠的血液保存起来，并解剖大鼠，取出相关的脏器，并保存在冰箱中。
- 对取得的组织和血样进行前处理，处理生物样品时，首要的就是去除蛋白质。通过沉淀蛋白可以使结合的药物释放出来，达到对待测组分提取和纯化的目的，还可预防提取过程中蛋白质的发泡，减少乳化的形成，以及保护仪器的作用。常用去的去除蛋白质的方法有加入水溶性的有机溶剂（乙腈、甲醇、乙醇、丙酮等）、加入中性盐、加入强酸、加入含锌盐及铜盐的沉淀剂等。对于大鼠组织样品的前处理时，要注意在制备匀浆时，要保持低温，快速操作，因为细胞膜中的多不饱和脂肪酸会因为研磨发生过氧化反应，而其二次氧化产物就是MDA，所以在研磨之前需要加入抗氧化剂；对于血液样品，通过方法查找，可以尝试用高氯酸来沉淀血浆蛋白，再离心分离。但MDA在酸性条件下不稳定，可能会对结果产生影响。再进行前处理完毕后，可以进行衍生化处理，后进行高效液相色谱处理。在准备实验时，要提前配置好MDA标准溶液与衍生化溶液，缓冲液等实验用品
HPLC中MAD检测应用
检测样本衍生化方法检测器类型
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