实验目的:
研究白芍总苷胶囊对小鼠干燥综合征的主要药效学作用,为其临床研究提供依据。
实验背景:
干燥综合征(Sjogren syndrome,SS)是一个主要累及外分泌腺体的慢性炎症性自身免疫病。临床上除有口干、眼干等症状外,尚有其他外分泌腺及腺体外其他器官的受累而出现的多系统受损的症状。本病分为原发性和继发性两类。原发性干燥综合征属于全球性疾病,在我国人群中的患病率为0.3%~0.7%,在老年人群中的患病率为3%~4%。本病以女性多见,男女比为1:9~20,发病年龄多在40岁~50岁,也见于儿童。本病病因复杂,尚无根治疗法。目前的治疗手段主要包括对症治疗、系统性治疗和局部治疗,而其中主要的药物糖皮质激素和免疫抑制剂又会对人体造成较大的副作用。白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)是从白芍饮片中提取的总苷,是白芍的有效成分。通过对白芍总苷的药理及临床研究发现,白芍总苷具有抑制自身免疫反应、抗炎镇痛以及保肝的作用,其作用十分显著且毒副作用小、安全性高。国家食品药品监督管理总局已经批准白芍总苷胶囊应用于类风湿关节炎等疾病并取得了较好效果。
近些年来,国内外学者对于白芍总苷用于干燥综合征的治疗已经有了越来越多的研究,其中绝大部分研究对于白芍总苷治疗干燥综合征有着较好的评价。
实验流程:
1.试剂配制
(1)抗原液的配制:取10只C57BL/6J小鼠颌下腺,分离包膜及结缔组织,剔除淋巴结,用氯化钠注射液洗净,匀浆,4℃、3000rpm/min离心10min,弃上层脂质,吸出上清液,置无菌试管中,以上操作均在低温下进行。BCA法测定蛋白浓度。在抗原上清液中加入磷酸盐缓冲液(PBS),稀释成4mg/ml溶液,再与完全弗氏佐剂混合,制备2mg/ml终浓度的乳化抗原液。
(2)硫酸羟氯喹混悬液的配制:取一片硫酸羟氯喹片,碾磨成粉,加入12.5 ml0.5% CMC-Na,研磨为均匀混悬液,冰箱保存。硫酸羟氯喹混悬液浓度:8mg/ml,小鼠给药容积:0.2ml/20g,剂量为80mg/kg,给药前混匀。
(3)白芍总苷高剂量混悬液的配制:称取1.26g白芍总苷,加17.5ml的0.5%CMC-Na,研磨为均匀混悬液,4℃冰箱保存。
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