课题背景:
樟芝(Antrodia Camphorata,Antrodia Cinnamonea)又称牛樟菇、牛樟芝、樟内菇、红樟菰等,为台湾特有珍贵真菌,属于担子菌亚门层菌纲非褶菌目多孔菌科薄孔菌属。分布于台湾山区海拔450~2000 m之间的牛樟树腐朽的心材内壁,具黄樟香气味。现代研究表明,樟芝含有多糖,三萜,腺苷,脂肪酸等成分,具有抗氧化,抗炎,强化免疫,扩张血管等药理作用。多糖类化合物是构成生物体的一类十分重要的有机结构成分,是生命的物质基础。多糖的种类各异,在生物体中行使着不同的功能.主要影响机体的网状内上皮系统和蛋白质的合成及抗体的生成,含有激活淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞,具有促进细胞因子的生成,改善机体的免疫功能的作用。樟芝多糖体中主要含有beta;-D-葡聚糖,它能通过刺激巨噬细胞、T 淋巴细胞、B 淋巴细胞等增强人体免疫功能,进而达到抗肿瘤的效果。
目前多糖的提取方法主要有水提取法、微波提取法、酶提取法和超滤法等。
1.乙醇沉淀法——此法可以初步分离出糖的组分。多数多糖类物质不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂,利用多糖这一性质就可以通过添加有机溶剂把不溶于溶剂的多糖类物质沉淀出来,从而得到多糖粗品。但此法只能作粗略的分离,且溶剂消耗大。但乙醇因其易挥发,不容易残留在多搪粗品上,对人体无毒等特点被广泛用于多糖的初步分离。
2.柱层析法——柱层析具有快速、简单、条件温和等优点,对不同聚合度的糖类分离特别有效。但是柱层析也有其缺点,因为是它本身多为葡聚糖或琼脂糖凝胶也是糖类,在洗脱时洗脱液会沾上自凝胶上洗下来的糖分而且溶剂消耗量大。
3.酶提取法——应用到有效成份提取中的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件中分解植物组织,加速多糖的释放或提取。
4.超滤法——超滤法提取纯化多糖具有简单、回收率高、产品纯度高等特点。超滤除了脱盐分离纯化等作用外,还同时具有浓缩功能,是纯化多糖的一种较理想的方法。目前这种方法在国外应用较多,近几年也在国内得到了部分的应用,特别是用于某些需要保持生物活性多糖的分离、纯化中。
5.超高压提取技术——全新的天然产物有效成分提取技术,其原理是在常温下用 100 MPa~1 000 MPa的流体静压力作用于料液上,保压一段时间,然后迅速卸压,使细胞内外渗透压力差突然增大,破坏细胞的各种膜,达到提取的目的与水回流法和超声波提取法相比较, 超高压提取法具有提取率高,提取时间短,工艺操作简单,能耗低,提取液杂质少,容易分离纯化等特点。另外,由于超高压技术是在常温下进行提取的,使多糖不会因热效应而损失或降低其生物活性。
6.微波和超声波法——微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部, 由于溶剂及细胞液吸收能量,使细胞内部温度升高,压力增大,当压力超过细胞壁的承受能力时,细胞壁破裂,位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来,传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。而超声波提取是依靠超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏所形成强大的冲击波或高速射流对有效成分与水相之间阻滞层进行的消除,另外超声波的次级效应,如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合,有利于提取。
目前市场上,流通的樟芝产品主要以人工发酵的粉末,胶囊的子实体形式销售,本实验采用江苏安惠生物科技有限公司生产的樟芝菌粉作为实验的样品,探究水提法提取樟芝多糖的最佳条件。
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