单克隆抗体项目中控样品CHO细胞残留蛋白检测方法开发开题报告
一、选题依据、目的和意义。
1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠B细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。将这种杂交瘤作单个细胞培养，可形成单细胞系，即单克隆。利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体，其结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的，而且在培养过程中，只要没有变异，不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能。[1]
生物制品的质量控制不仅是对终产品的质量控制, 而是对整个生产过程的质量控制。细胞基质作为主要原材料, 其质量的优劣直接影响生物制品的质量和产量, 尤其是生物制品的安全性。一般认为, 细胞基质存在的潜在危险因素包括:促生长蛋白及细胞残留蛋白、潜在病毒、细胞DNA。［2］。
宿主细胞蛋白(host cell proteins，HCP)含量也随之增加，上下游生产工艺面临不断挑战。HCP 所含蛋白质异常复杂，虽然一些 HCP可能会被降解，但残留 HCP 仍会引起药物临床使用中的不良反应，从而影响药物的安全性和有效性。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunesorbent assays，ELISAs)是目前 HCP 检测的重要方法之一，ELISAs 可以定量检测药物中总 HCP 含量，但存在局限性。[3]
本文将以企业中单克隆抗体的制备技术，通过对国内外先进检测技术的整理，了解正在开发的包括 LC-MS /MS 在内的多种分析方法进行 HCP 检测，将为药物工艺过程开发和验证提供更多依据。探讨CHO细胞残留蛋白检测方法开发，希望能为单克隆抗体制备检测中的工艺流程开辟一些新的思路。
- 国内外相关动态
随着生物制药公司在治疗性 mAbs 领域的投资加大，使得 mAbs 处于生物制药行业的最前沿，每年大约有4 个新产品被批准上市，估计到2020 年，抗体药物全球销售额将达到近 1 250 亿美元。mAbs 自从 20 世纪80 年代中期进入市场以来，随着抗体基因克隆到哺乳动物细胞表达技术的发展，推动了生物药物制造领域的巨大进步。mAbs 市场需求增加，促进了 mAbs 生产技术革新，其生产量已远高于 20 世纪 80 年代。随着宿主细胞表达量的提高，培养基中相关杂质也随之增加，对下游处理(downstream processing，DSP)工业技术提出了更高要求。
CHO 细胞是 mAbs 生产的主要宿主细胞，CHO 细胞可以将大量 mAbs 分泌到培养基中，而一些细胞的自身分泌表达的宿主细胞蛋白质以及细胞裂解释放的胞内蛋白质可混合到细胞培养基中，将一起进入下游纯化工艺。由于产品纯度是关
键质量属性(critical quality attribute，CQA)，药物中最终残留 HCP 杂质的含量和种类，已成为了 mAbs 生物制造加工中的重要关注领域。美国和欧洲药典的监管指南中明确了生物制药中可接受的 HCP 水平，但强调了 HCP 的危害及减少 HCP杂质残留的重要性。通常，工业标准是终产品中 HCP含量为 100ppm 或更低。
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