开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、课题的研究背景、意义和目的
自1959年免疫抑制剂6-巯基嘌呤被成功用于临床以来,免疫抑制剂已在器官移植、自身免疫抑制病的治疗中发挥了重要作用。然而,当前市场上所用大多数免疫抑剂有严重的毒副作用如肝中毒、肾中毒和诱发高血压等。因此,有必要开发新型毒副作用小的免疫抑制剂。微生物是免疫抑制剂的可靠来源。昆虫肠道菌是生活在健康昆虫肠道的一类环境微生物,因此昆虫肠道菌可能是免疫抑制剂的重要来源。人们自半世纪前第一次从海洋真菌(Cephalosporium)中发现抗生素头孢菌素以来,开始认识到海洋真菌是具有特殊结构的生物活性物质的重要来源。目前海洋真菌来源的新天然产物已超过了1000个,它们结构新颖多样,活性显著(包括抗病毒、抗肿瘤、抗菌、酶抑制等)。海洋真菌代谢途径复杂,代谢产物种类多样,日益受到研究者的重视。本实验所用真菌为大刀螳螂肠道真菌(Daldinia eschscholzii)和海洋生物内生真菌Curvularia sp.(从江苏白姑鱼体内分到的一株真菌,编号IFB-Z10),意欲提取酸性或中性多糖。
多糖(polysacharides,PS)广泛存在于植物、动物和微生物组织中,是具有多种生物活性的天然大分子化合物。真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体及其发酵液中分离出的代谢产物,是一类由10个以上的单糖以糖苷键连接而成的天然高分子多聚物。多糖与蛋白质一样,具有生物大分子的复杂结构,显示特定的生理和生物学活性,其中包括免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘、降血压、抗衰老、抗疲劳、抗突变、抗凝血等活性。
真菌多糖是不会为淀粉酶分解的,还会透过人胃肠壁到血管,连通心、脾和肝等脏器,通过药物的作用,实现人体各种器官疾病的治疗,不会受到淀粉酶的分解,具有广阔的应用前景,已经成为研究的热点。近年来,真菌多糖提取精制工艺也取得了丰硕的成果。
本实验通过热水浸提及稀碱液提取,乙醇醇沉的方法从两种供试菌中提取多糖,以期得到中性糖或酸性多糖目的物,采用硫酸苯酚法、考马斯亮蓝法、硫酸-咔唑法对多糖粗品进行糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量的测定,并对提取条件进行摸索,同时利用离心,离子交换柱层析等实验方法对所提取目的物多糖粗品进一步分离纯化,以期得到多糖纯化组分,为今后多糖活性研究打下基础。
二、课题研究的主要内容
1. 真菌多糖的提取
分别用水提法和碱提法对两种内生真菌多糖进行提取,比较不同方法提取效果,初步确定提取工艺,以期得到内生真菌多糖粗品。
2. 真菌多糖的分离
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