开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
课题背景:
损伤引发的肝脏疾病已成为常见病、多发病,更为严重的是其引发的肝功能衰竭和肝性脑病等,发病率和死亡率高,极大地威胁着人类的健康。很多因素可引起肝损伤,如病毒、生物、药物、理化、酒精等。现代医学对肝损伤的研究比较深入,已从多方面探讨了肝损伤的发生机制,并研制开发出了膜保护剂、抗脂质过氧化剂及免疫调节剂等保肝药物,但疗效尚难尽人意,且因其毒副作用,限制了临床应用。
中药及其配方有着多靶点、多环节综合作用的特点,在治疗肝损伤方面有着独特的优势。研究表明,中药里的一些活性成分,有机酸类、生物碱类、环烯醚萜类、黄酮苷及多糖,对肝损伤都有显著治疗及防护作用。我国古代的本草典籍中记载了许多用于保肝且药效显著的中草药,这些中草药从整体调节人体机能、标本兼治,因此,从祖国传统中药宝库里挖掘安全、稳定、高效、低毒的保肝药物有着重要的意义。
铁皮石斛为兰科石斛属植物铁皮石斛的干燥茎,是我国特有的名贵中药。我国第一部药物学专著《神农本草经》记载石斛:“味甘,平。主伤中;除痹、下气;补五脏虚劳、羸瘦、强阴。久服厚肠胃,轻身延年。” 几千多年前的道家医学经典《道藏》将铁皮石斛列为“中华九大仙草”之首。近年来,国内外的学者发现石斛主要成分有多糖、生物碱、氨基酸、菲类化合物等。这些天然的化学成分具有丰富的药理作用。石斛药用资源极为丰富,以前往往因为其特殊的生长环境和自身的繁殖极困难,加上经济价值极高,长期无限制的采挖和不合理地开发利用,导致石斛资源越来越少。如今随着研发工作的开展,国内外有关机构在铁皮石斛的组织培养与快速繁殖技术、人工栽培技术方面进行了大量研究,已为铁皮石斛规模化栽培提供了较强的技术保障。
据文献报道,多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖、抗辐射及保肝等多种药理活性,目前石斛多糖研究热点以免疫调节、抗氧化、抗肿瘤居多,关于新鲜石斛提取工艺研究及石斛多糖对酒精性肝损伤的作用研究报道较少。现代医学认为, 酒精在肝脏代谢过程中会使活性氧形成增加和抗氧化物减少, 从而导致脂质过氧化增加。中药多糖可通过改善微循环、抑制脂质过氧化、清除自由基、提高GSH含量、增强GSH-Px活性等分子基质,保护肝细胞、降低肝酶、促进损伤肝细胞的修复。因此,对石斛中有效成分多糖深入开发,在资源的合理利用及人类健康和疾病治疗方面均具有广阔前景。本研究选用石斛作为研究对象,通过对提取工艺的筛选,酒精性肝损伤药效学评价等方面的研究,为铁皮石斛多糖进一步开发提供一定参考。
实验流程:
一.石斛多糖的粗提取
- 新鲜铁皮石斛100 g,洗净后粉碎,放入圆底烧瓶中。
- 加入4000 ml的蒸馏水(料液比1:40),于70 ℃水浴中提取,提取时间4 h,提取1次。
- 滤液9000 r/min离心30 min,取留样测体积上清于65 ℃减压浓缩,测蛋白多糖含量。
- 取浓缩液用盐酸调pH=3脱蛋白,4 ℃静置过夜后9000 r/min离心30 min,离心后的上清液用NaoH调pH=7,留样测体积。
- 上清液中加入4倍体积95 %乙醇,混合,静置过夜(4 ℃)9000 r/min离心30 min得沉淀,留样测体积。
- 沉淀用蒸馏水溶解后离心,95 %乙醇再沉淀一次,静置过夜(4 ℃),9000 r/min离心30 min,取沉淀物真空干燥即得石斛粗多糖,称重记录。
二.含量的测定
1. DOP多糖含量的测定
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