一、课题研究的目的及意义随着社会的发展,人民的生活水平日益提高改善,随之而来的糖尿病、高血压、心绞痛以及其他血栓性心脑血管性疾病频发,其中一些疾病严重影响人类正常生活,甚至会给人类健康和生命造成极大威胁,而且给患者、家庭及社会带来极大的痛苦和沉重的负担,因此针对血栓型心脑血管性疾病的治疗与预防药物的研制迫在眉睫。
地龙蛋白具有较好的抗血栓活性,其中地龙蛋白中的纤溶酶和蚓激酶能直接溶解纤维蛋白,发挥强力的直接溶栓作用;纤溶激活蛋白则由自身产生纤溶酶原,进而转化为人体的纤溶酶,间接溶解血栓,同时促进微血管再生,建立侧枝循环,有助于消除与微循环障碍有关的衰老和肿瘤发生。
因此,地龙蛋白对体内的凝血系统和纤溶系统具有广泛的影响,既可明显降低血小板黏附率,延长体内血栓形成和溶解体内血栓,又能增加脑血流量,减少脑血管阻力,改善微循环,减少三高对人体的危害。
本课题在实验室前期的不同来源地龙蛋白提取物纤溶活性研究的基础上,通过红细胞耗氧、压积和动物模型构建,测定地龙蛋白肽压片糖果的体内促微循环活性。
并通过对地龙蛋白肽,地龙提取物以及纳豆激酶进行配伍和正交设计,以体外活性实验测定为指导优化确定主要组成成分及配方组成,评估地龙蛋白组方改善血流微循环的作用。
二、拟研究或解决的问题1、对地龙蛋白进行配设计并通过纤维平板法进行体外纤溶活性优化2、通过大鼠体内实验评估地龙蛋白组方改善局部血流微循环的作用三.研究方法和手段1、地龙蛋白体外纤溶活性组方优化本实验主要采用纤维蛋白平板法测定地龙蛋白体外纤溶活性第一步:平板制备(1)准确称量20mg人纤维蛋白原,全部倒入50ml离心管底部,依次加入10ul氨苄青霉素,1ml灭菌生理盐水搅拌溶解,置于盛有37℃的水的烧杯中预热。
(2)加入10ml冷却至55-60℃的琼脂溶液,再加入3ml总酶活为26.7U的凝血酶溶液,迅速混匀,倒入平板中(3)用10ul微量移液器吸去其中少量的小气泡,水平放置5min,转移至4℃冷却10min,使其充分凝固。
(4)取出凝固后的平板,用1ml枪头削去部分尖端和尾部,均匀打孔,使孔直径约3mm,静置30分钟,用10ul微量移液器吸去孔中渗出的液体。
第二步:纤溶活性测定(1)待琼脂孔中不再有水渗出时,10ul微量移液器吸取10ul不同组别的蛋白溶液,分别加入到对应编号的孔中。
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