开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
课题背景：
乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一，是发病率最高的女性恶性肿瘤，是世界肿瘤发病率第三1-3。恶性肿瘤的转移（Metastasis）涉及侵袭、内渗、外渗和转移4个步骤，转移是许多癌症病人死亡的一个重要原因，上皮间质转化和肿瘤转移是一个非常复杂的过程。
趋化因子，属于化学诱导性细胞因子，根据蛋白质N末端的半胱氨酸残基的数目及位置分为四个亚科，CXC，CC，CX3C和C。其中CCL2属于CC趋化因子家族。目前证据表明，趋化因子在细胞迁移中发挥重要作用，影响机体的正常发育，炎症反应以及血管形成等，趋化因子在正常细胞中的作用可扩展到肿瘤生物学领域，包括调节肿瘤细胞增殖，血管形成和免疫系统对肿瘤的反应等4。CCR2作为一个CCL2配体的受体蛋白，可以通过介导CCL2/CCR2信号来发挥促癌的作用。
RhoA蛋白家族是一组具有GTP酶活性的小GTP结合蛋白，分子量约为20~30kD，属于Ras超家族成员。人类Rho家族包括约23个成员。依据它们的氨基酸序列的不同，又可细分为6个亚家族5。自从第一个RhoGAP被鉴定以来，人类基因组中超过50种RhoGAPs被发现。其中有一个亚家族蛋白，它们都含有START结构域，即DLC（Deleted in live cancer）蛋白亚家族。这个亚家族包括DLC1、DLC2（又被称为START-GAP2或者StarD13）、DLC36,7。典型的DLC蛋白含有三个独特的结构域，分别为定位于N末端的SAM（Sterile a motif）结构域、保守的RhoGAP结构域以及位于C末端的START结构域6。其中DLC2又被称为STARD13，定位于染色体13q12.3。DLC2对RhoA和cdc42具有GAP活性8,9。并且在许多类型的癌症中是下调表达的，包括肺癌、卵巢癌、肾癌、乳腺癌、结直肠癌中6。Feng Tang的研究也表明在MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞中，miR-125b可以抑制STARD13的表达，从而促进细胞的迁移和侵袭10。
运用Targetscan，miRanda等生物信息学软件预测出miR-125b的另一个潜在的靶基因CCR2（NM_001123396），即chemokine(C-C motif)receptor 2。CCR2的3rsquo;UTR上共含有3个miR-125b的结合位点，其中2个是保守位点，1个是不保守位点。
竞争性內源RNA（Competing endogenous RNAs，ceRNAs），ceRNA理论即不同RNAs之间可以通过竞争结合相同的miRNA来实现相互调节。如果一个目标转录体，它的一个ceRNA浓度上升的时候，会竞争结合它们共有的miRNA，从而使miRNA对目标转录体的抑制减弱。这就使得一条mRNA可能存在非编码功能，这种非编码功能与其编码功能有可能不一致，甚至是相反的，从而建立一个庞大的调节网络。
本实验室之前的研究表明，在乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中，CCR2和STARD13构成ceRNA关系。CCR2 3rsquo;UTR可以上调MCF-7和MDA-MB-231细胞中的STARD13的表达。通过观察癌细胞形态来进一步判断此RNA的作用，主要包括细胞周期的变化，细胞凋亡，细胞增殖。
课题目标：
通过利用竞争性内源RNA和miRNA的理论知识，构建带3rsquo;UTR的CCR2 RNA 序列，将其转染至乳腺癌细胞系，观察癌细胞迁移能力和侵袭能力的变化，以及细胞增殖能力，细胞周期，细胞凋亡的情况。
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