- 实验背景
单纯疱疹病毒 (HSV)分为 I型 (HSV-1)和 II型 (HSV-2)。单纯疱疹病毒 II型 (HSV-2)主要感染外生殖器和躯干下部皮肤, 引起生殖器疱疹、新生儿疱疹, 并认为与宫颈癌的发生相关,，同时也会增加 HIV 的传播感染机率，由 HSV2 病毒介导的感染可致孕妇流产，新生儿致残致畸，且绝大多数留有后遗症，另外，潜伏性、复发性、并发性也是其感染的重要特点。
HSV－Ⅱ基因组为一线性双链 DNA 分子，根据基因表达时序的不同，分为立即早期、早期、晚期基因，分别称为alpha;、beta;、gamma; 基因，分别编码立即早期蛋白、早期蛋白及晚期蛋白。 立即早期基因的转录出现在病毒 DNA 复制之前，调节 beta;、 gamma; 基因的表达。 迄今为止，人们已知的 HSV 编码的立即早期蛋白有5个，它们被称为感染细胞多肽分子 （infected cell polypeptides，ICPs），包括ICP0、ICP4、 ICP22、ICP27 和 ICP47。HSV-2病毒颗粒上有 11 种包膜糖蛋白, 其中糖蛋白 G( gG2)为型特异性抗原, 在病毒诊断、分型和疫苗研究中有举足轻重的地位。HSv-2糖蛋白D是HSV的主要免疫原，大量的免疫学 研究表明妒能诱导细胞免疫和体液免疫反应，引起高滴度的中和抗体，激发迟发超敏反应及T细胞增殖反应。所以gD是抗HSV一2感染中最重要的保护性抗原。
- 实验目的和意义
利用高表达II型单纯疱疹病毒基因工程抗原的工程菌，建立纯化表达蛋白的纯化工艺，获得可溶性高纯度蛋白。对纯化的蛋白进行SDS-PAGE纯度分析及ELISA等抗原性分析。
- 技术路线
制备病毒DNA
PCR扩增序列
构建重组表达载体
诱导表达
表达产物检验
- 实验内容
4.1 HSV一2病毒DNA的制备 用适量HSv-2 SAV株病毒 悬液感染成片的Vero细胞．常规方法体外连续培养。待细胞 变大变圆其细胞病理效应病变(CPE)达 ，反复冻融3次 收集病毒。取病毒悬液提取HSV一2 DNA。
4.2 PcR扩增HSV-2 gD片断参考已发表的HSV2糖蛋白 D核酸序列，设计1对上下游引物，反应体系为30mu;L，94℃变性10 nlin后进入 PCR循环：94℃变性50 s，56℃退火l min，72℃延伸l min，共30个循环，最后72℃延伸5 min。取10mu;L PCR产物琼脂糖电泳。结果在DNA成像系统照相并打印结果。
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