开题报告内容：
背景介绍、研究现状及选题意义：
背景介绍及研究现状：
CRT是一种相对分子质量为46kD的DaCa2 结合蛋白，主要位于非肌细胞粗面内质网和肌质网中，由人19号染色体上单一基因编码，包含9个外显子，具有高度的进化保守性。CRT具有多种功能，参与伴侣分子活性及细胞内钙离子环境平衡的调节，细胞间黏附信号的调控，内质网中折叠和低聚反应过程中黏蛋白的合成，以及抑制血管生成和肿瘤细胞生长。此外，CRT在主要组织相容性复合体I的组合、类固醇介导的基因的调节以及锌的结合和储存中起重要作用。细胞核中的CRT能调节核蛋白迁移和影响信号经由核甾体激素受体和整联蛋白。当用蒽环类抗生素、奥沙利铂、放射治疗及缺氧等处理，细胞表面的CRT暴露，并成为一种来吃我信号，招募树突状细胞和巨噬细胞，导致免疫反应。
CRT还与肿瘤的发生有关，通过增加细胞与细胞间、细胞与基质间的黏附能力或者减少MHC－I类抗原提呈发挥作用。CRT的表达已经在多种肿瘤中被发现，例如黑色素瘤、肝癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌及乳腺癌等。Chao等研究表明，CRT主要表达于恶性肿瘤细胞和凋亡细胞的表面，前者主要包括血液系统恶性肿瘤中的急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤，以及实体瘤中的恶性胶质瘤、膀胱癌和卵巢癌等，但是在对应的正常细胞中却很少表达。以往的研究还表明CRT亦存在于有活性的外周血Ｔ细胞和循环中的中性粒细胞。
选题意义：
G 蛋白偶联受体是一种典型的定位于细胞膜的受体蛋白，含有7 个跨膜结构区，在高效真核启动子的作用下，重组基因在细胞内表达出CRT-G 蛋白偶联受体融合蛋白; 利用G-蛋白偶联受体的细胞膜定位能力可将CRT 大量带到肿瘤细胞膜上。当将上述CRT 包被的细胞作为细胞抗原免疫小鼠后，在小鼠体内诱导出很强的抗同种肿瘤的免疫杀伤效应，提示这种基因工程改造的细胞具备用作肿瘤疫苗的潜在价值。
实验思路、主要内容和研究方法：
实验思路：首先进行杂交瘤阳性克隆的筛选、克隆、鉴定；据实验需要，还需对杂交瘤细胞进行冻存，进而需要在实验时进行复苏；最后进行单克隆抗体的大量制备和特性检测。
主要内容分为：
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