课题名称 SPI包衣DTX纳米结晶细胞摄取和细胞毒研究课题性质 基础研究■应用课题 设计型 调研综述 理论研究一、本课题研究的目的： 探究细胞对SPI包衣DTX纳米结晶的摄取与胞内分布情况以及纳米结晶的抗肿瘤效应。
二、研究方法：一.纳米结晶的制备1.变性蛋白的制备 DTX纳米混悬液采用反溶剂沉淀法及超声波处理法制备。
首先，SPI需要经过高温变性暴露出疏水残基，增加其水溶性。
过程如下，称取450mgSPI与试管中，然后加30ml蒸馏水进行溶解，并置于室温下搅拌混合2h。
用1mol/ml NAOH调节溶液PH到7，再置于110 C油浴锅（乙二醇：水=1:1）中加热30min，最后将变性蛋白冷却至室温。
2. 纳米结晶的制备 取溶解有DTX的丙酮溶液取1ml加入到上述已制备好的蛋白溶液中，在冰浴条件下剧烈搅拌，随后，立即用超声探头（20~25kHz,宁波生物技术公司）在400W下超声粉碎10min。
在50rmp，25 C下减压旋转30min蒸发去除掉残余的丙酮。
(SPI事先用FITC标记后重复上述步骤制备FITC标记的DTX纳米混悬液，以备后用）3.纳米结晶的表征3.1 粒径用纯水对上述值得的纳米混悬液进行50倍的稀释，然后再室温情况下利用纳米粒径测定仪，测定其纳米混悬液的粒径和分散系数。
3.2 TEM 与 SEM TEM：将DTX纳米混悬液取几滴滴在铜网上，并使用2%的磷钨酸（w/v）进行染色5分钟，再置于室温下干燥5min, 用TEM在加速电压为200kV条件下进行观察。
SEM: 将DTX纳米混悬液取几滴滴在铜网上，25摄氏度下干燥30min，并在真空条件下包裹金3min，用SEM在电压为10kV的条件下进行观察。
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