苦地丁具有清热解毒、散结消肿等作用,对感冒发热、咽喉疼痛等多种炎症有较好疗效[1]。
然而,目前未有太多对其抗炎药效的研究报道,仅有Yang[2] 从Nfr2 和 MAPKs通路研究发现其主要成分紫堇灵具有较好抗炎作用, Zhai[3]等发现苦地丁提取物具有良好的体内外抗炎药效。
为了深入研究苦地丁抗炎药效作用,本实验将借助脂多糖诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞炎症模型研究苦地丁生物碱成分及二氢血根碱抗炎药效,测定相关细胞因子和炎症介质水平,对其抗炎药效加以阐明,为其进一步临床应用提供实验参考。
本实验的研究主要分为两方面:1.确定造模剂LPS(脂多糖)的作用浓度,依次考察筛选生物碱组分、二氢血根碱的药效作用浓度及LPS与药物同时作用于细胞室的细胞活力。
2.考察生物碱成分给药时,空白组、模型组及各剂量给药组细胞上清液NO、TNF-alpha;、IL-1beta; 及 IL-6含量,分析生物碱成分抗炎药效;考察二氢血根碱给药时,空白组、模型组及各剂量给药组细胞上清液NO、TNF-alpha;、IL-1beta; 及 IL-6含量,分析生物碱成分抗炎药效。
分析二氢血根碱与生物碱成分抗炎药效关系。
研究方法和手段:1. MTT法:本实验药物浓度筛选及细胞活力验证所用主要方法,MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。
二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在540 或720nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
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