综述:建立重组蛋白哺乳动物细胞表达平台 谢宗任近年来,重组蛋白药物,尤其单克隆抗体,在医疗应用及科学研究中的得到爆炸式发展[1]。
生产重组蛋白药物的经典方法是将外源基因插入宿主细胞系基因组中,筛选稳定细胞株持续稳定地表达重组蛋白。
但是建立稳定细胞系过程复杂,耗时费力,最短也要数月之久。
而研究中经常需要快速得到一定量的多种候选蛋白或者某种蛋白的系列突变体,此时哺乳动物细胞中重组蛋白瞬时表达技术(TGE)更具优势。
TGE 技术是利用瞬时转染将表达质粒转入宿主细胞周质,通过细胞质中游离态的质粒表达目的蛋白。
宿主细胞通常可在转染后的 2-14 天内持续表达重组蛋白,滴度可达数十毫克至数克每升[2,3]。
1宿主细胞系哺乳动物细胞已经广泛用于重组蛋白的生产, 原因在于哺乳动物细胞能够完成复杂的翻译后修饰, 使蛋白药物更加稳定和有效。
1986年FDA批准了第一个由CHO细胞表达的组织纤溶酶原激活剂 (tPA) 作为治疗性蛋白, 使得哺乳动物细胞生产重组蛋白得到了快速的发展。
哺乳动物细胞表达系统经过近30年的发展, 其产物的表达量已由过去的50 mg/L提高到了5~10 g/L, 提高了100多倍[4]。
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