开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题背景
目前大部分药物临床应用时都面临一个问题：在到达作用部位之前，已经被各种体内外因素影响，导致血液中药物浓度在毒性和无效性之间呈锯齿状波动。因此利用固定载体连接药物，将药物特异地导入一定器官、组织和细胞成了提高药效、减小毒副作用的一个行之有效的方法。脂质体作为一种被广泛应用的载体，有以下优点：制备简单，磷脂成分无毒，无免疫原性，可被生物膜利用；易携载和释放各种药物，可保护药物，延缓其生物降解；在载药脂质体表面结合不同的配基如抗体、糖脂等可将药物地送到特定靶组织和靶细胞。[1]
按释药机制，脂质体可被分为好几类。其中温度敏感脂质体（又称热敏脂质体）能够在正常体温下保持稳定，在高于生理温度情况下会敏感释放药物。构成脂质体的磷脂都有其特定的相变温度，环境温度低于该温度时，脂质体膜致密排列呈胶晶态，亲水性药物很难透过该膜；而当脂质体暴露于比该温度高的环境中时，脂质体膜则会变为结构疏松的歪扭构象，膜通透性增加，药物可被释放到靶器官中去[2]。而近红外染料cypate具有产生近红外荧光和光热效应的特性，被镶嵌到磷脂双分子层中后，可使得包裹药物的脂质体能够在荧光照射下发热升高温度。，
- myc基因是myc基因家族的重要成员之一，myc基因家族及其产物可促进细胞增殖、永生化、去分化和转化等，在多种肿瘤形成的过程中处于重要地位[3]。一般认为，c-myc的扩增与肿瘤的发生发展和转移密切相关，其表达的c-myc蛋白是一种涉及细胞分化、生长、增值以及凋亡的转录因子，并且参与调节人类15%的基因[4]。SiRNA（又称小干扰RNA或沉默RNA）被证实能够抑制c-myc基因的表达，从而实现抑制肿瘤的作用[5]。由此可推断出，若在脂质体中添加相应的siRNA，可有效抑制c-myc基因的表达，对于肿瘤治疗有很大的益处。
替莫唑胺为咪唑并四嗪类具有抗肿瘤活性的烷化剂，被应用于复发性高级别脑胶质瘤的治疗，可考虑将其包裹于含有cypate染料的热敏脂质体中，在该热敏脂质体发挥作用的条件下，最外层带正电荷的聚合物产生质子海绵效应，使得肿瘤细胞中的c-myc基因暴露于脂质体携带的siRNA面前，被充分抑制表达。两种机制双管齐下，大大增强替莫唑胺的抗肿瘤疗效。
- 要解决的问题
- 脂质体的包封率问题。脂质体作为药物载体只有对药物有效的包载，才有可能更好的发挥治疗作用[6]。
- 细胞的转染率问题。阳离子脂质体表面带正电荷，与目的基因通过静电作用相结合。实验表明很多因素会对脂质体的转染产生影响，从而影响药物疗效[7]。
- 阳离子脂质体的细胞毒性。阳离子脂质体作为一种非病毒基因载体，其毒性多于类脂结构有关，不过因结构不同，毒性产生机制也大有区别[8]。
- 可行性分析
阳离子包裹的脂质体近年来被广泛应用，关于其合成方面有大量资料可检阅，综合被包裹的药物特点等一些因素，选择出了一种较为合适的合成方法。
该实验要求在脂质体的磷脂双分子层中嵌入近红外染料cypate，第一层阳离子多聚物外面又要增加一层siRNA,这对合成制备过程提出了很大的要求。迄今为止，多数使用阳离子脂质体包裹药物的案例均获得了成功，使得抗肿瘤药物提高疗效成为可能。通过合理的改进及优化，这类药物载体有着十分光明的研究前景。
- 研究方法和内容
制备脂质体：利用DPPG和DPPC两种磷脂，添加cypate染料采用薄膜水化法制备脂质体壳，继而将TMZ包裹进脂质体，然后依次添加PLA阳离子层和siRNA,最后再包裹一层PLA即可。
制备完成后，可通过相应的细胞实验验证其抗肿瘤效果、细胞毒性等，在细胞实验成功的基础上还可进行一定的动物实验来验证该脂质体的疗效。
- 工作计划
2月26日—3月20日：完成文献查阅、开题报告等前期工作。
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