一、研究背景氢氯噻嗪为利尿药、抗高血压药。
主要适用于心原性水肿、肝原性水肿和肾性水肿：如肾病综合征、急性肾小球肾炎、慢性肾功能衰竭以及肾上腺皮质激素与雌激素过多引起的水肿；高血压；尿崩症[1]。
长期应用时宜适当补充钾盐。
为了使氢氯噻嗪在人血浆中浓度测定的分析方法具有科学性，适用于相应的检测要求，本课题拟对利用LC-MS/MS对人血浆中氢氯噻嗪浓度测定的方法进行方法学验证。
二、研究内容1. 实验目的本实验的目的是进行用液质联用（LC-MS/MS）法测定人血浆中氢氯噻嗪（Hydrochlorothiazide）浓度的分析方法[2]。
2. 实验材料2.1 仪器和材料 API 5500 质谱仪（Analyst 软件 1.6.3，AB公司） 岛津 LC30AD高效液相色谱系统[3] Waters XSelect HSS T3 2.5 mu;m (50 x 2.1 mm)色谱柱（含预柱 ACQUITY UPLC CSHTM C18 1.7mu;m） RACKCHANGERⅡ自动进样器 Watson LIMS系统 7.4 SP1 版（Thermo Fisher Scientific Inc.） 赛多利斯MCM36电子天平 梅特勒-托利多XS205DU电子天平 赛默超低温冰箱88700V 赛默ES系列冷冻冰箱 Haier医用冷藏箱HYC-940 IKA 涡旋仪 Eppendorf5920R 离心机 赛默飞世尔1300系列Ⅱ级A2型生物安全柜 移液器，Eppendorf 昆山KH-300B超声波清洗器注释：同等材料可以替换。
2.2 化学品和试剂 Hydrochlorothiazide（批号： 100309-201404， 纯度： 99.7%；厂家：中国食品药品检定研究院；过期日期： 03/31/2019； 校正因子：1.00） Hydrochlorothiazide-13C-d2（批号： 1081-038A4；纯度： 96.3%；厂家： TLC；过期日期：02/27/2020；校正因子：1.04） 去离子水（密理博纯化系统自制） 甲酸，色谱纯，Sigma 甲醇，色谱纯，Fisher Scientific 乙腈，色谱纯， Fisher Chemical 二甲基亚砜（DMSO），Solarbio 甘油三酯 混合物，Sigma 空白人血浆含 EDTA-K3，BioreclamationIVT 空白人全血含EDTA-K2，公司内部提供 注释：除了分析物和内标，其他试剂可以更换为等同试剂。
对于分析物和内标，如果用到除列出的批号外的多个批号，所有批号都应该在总结报告中列出。
3. 实验设计方法验证包括：选择性，基质效应，回收率，灵敏度，样品残留，线性，准确度，精密度和稳定性的评估[4] [5]。
3.1 储备液检查精密称量两份约重1 mg的Hydrochlorothiazide于1.5 mL离心管中，并用校正因子校正后，分别加适量的DMSO溶解配制成浓度为1.00 mg/mL的溶液，即得储备液1和储备液2。
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