文献综述
1.肿瘤标志物
癌症又称恶性肿瘤,目前是世界国家的主要死亡原因之一,是全社会共同关注的健康问题。
肿瘤标志物是由肿瘤细胞在肿瘤发生和增殖过程中合成的一类物质,它的存在和浓度变化可直接反映出肿瘤的性质及发展,并且指导临床领域肿瘤的诊断和治疗[1]。肿瘤标志物最早由美国的 Herberman 在人类免疫及肿瘤免疫诊断会议上提出,之后在英国的肿瘤发生生物学和医学会议上被认可[2]。肿瘤标志物主要包括肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原两大类[3]。最常见的肿瘤标志物有癌胚抗原(CEA)、甲胎抗原(AFP)、前列腺特异抗原(PSA)等[4]。
癌胚抗原(CEA)是大肠癌组织产生的一种糖蛋白,作为抗原可引起患者的免疫反应,它是一个重要的肿瘤标志物,能向人们反映出多种肿瘤的存在,对大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好的肿瘤标志物[5],但特异性不强,灵敏度不高,对肿瘤早期诊断作用不明显。因此,血清中肿瘤标志物的检测对肿瘤预警及早期诊断具有重要的科学意义和应用前景。
2.蛋白质的常用检测技术
蛋白质是生命的物质基础,对于蛋白质的定量分析是研究蛋白质功能、揭示细胞机理、寻找疾病蛋白标记物和药物靶标的重要手段。常用的蛋白质定量的经典方法包括凯氏定氮法、双缩脲法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)、紫外吸收法和考马斯亮蓝法(Bradford法)。此外,还有蛋白芯片技术和电化学免疫传感器等电化学检测方法、核酸适体等分子生物学检测技术、以及电泳法和质谱法[6]。
癌胚抗原作为蛋白质中的一种糖蛋白,是一种重要的肿瘤标志物,通常人体血清中的CEA浓度低于2.5ng/mL。目前,临床上用来检测CEA的方法主要有酶联免疫吸附测定(ELISA)、荧光免疫测定、放射免疫测定、化学发光免疫测定、安倍免疫测定、免疫金标技术、蛋白芯片技术等[7]。2005年陈永伟等通过时间分辨荧光免疫分析法,用稀土离子标记CEA单克隆抗体,在96孔微孔孔板上据固相夹心法建立CEA TRFIA对血清CEA测定[8]。2007年刘胜利等应用电化学发光分析法测定血清中CEA,并确诊结直肠癌病人[9]。由于传统的测定方法存在操作复杂、成本高、灵敏度较低等问题,要设计并发展一种更高灵敏、高特异、更简便的方法,可以进行对微量CEA的检测。
3.电化学免疫传感器
电化学免疫传感器是一种将电化学分析方法与免疫学技术相结合的系统,改变目标物的浓度使得电化学活性物质的量发生变化,从而通过电极来得到电信号,实现对待测物的定量检测。由于免疫分析的高特异性与电化学方法的高灵敏度,电化学免疫传感器的使用可以降低成本,缩短耗时,方便操作,提高通量[10]。
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